食物中钙的测定方法 |
| 发布时间：2005-08-23 |
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一、原子吸收光谱分光光度计法
1.原理
每种元素的原子能够吸收其特定波长的光能，而吸收的能量值与该光路中该元素的原子数目成正比。用特定波长的光照射这些原子，测量该波长的光被吸收的程度，用标准溶液制成校正曲线。根据被吸收的光量求出被测元素的含量。
2.适用范围
依据中华人民共和国国家标准，钙：GB12396-90。适用于所有食品及保健品中元素含量的测定，其元素含量在1mg/kg浓度以上。
3.仪器
原子吸收光谱分光光度计
4.试剂
（1） 硝酸（GB） 高氯酸（GB）
（2） 混合酸消化液：硝酸+高氯酸 按4：1混合
（3） 0.01mol/L 8-羟基喹啉溶液：
A. 配制1mol盐酸（GB）溶液
B. 称1克8-羟基喹啉,用1mol盐酸定溶至10mL
C. 将上述溶液倒入容量瓶,定溶至1000mL。
（4） 1%镧溶液：称量11.725克La2O3（纯度为99.99%），加25mL 盐酸（GB）， 使之溶解，用去离子水定溶至1000mL，即成。
（5） 去离子水：（KΩ）80万以上。
（6） 国家标准物质研究中心提供的标准贮备液：钙标准溶液，标准液浓度均为1000μg/mL
（7） 标准质控物：国家标准物质研究中心提供的猪肝粉，室温干燥保存。
（8）标准储备液配制：吸取以上钙标准溶液0.25mL,移入10 mL容量瓶中,然后用稀释用溶液(镧或8-羟基喹啉)定容至10 mL。标准溶液须放聚乙烯瓶内，4℃冰箱保存
5.操作步骤
5.1样品制备：每种样品采集的总重量不得少于1.5Kg，样品须打碎混匀后再称重。鲜样（如：蔬菜、水果、鲜鱼等）应先用水冲洗干净后，再用去离子水充分洗净，凉干后打碎称重。所有样品应放在塑料瓶或玻璃瓶中4℃或室温保存。
5.2 样品消化：准确称取样品干样（0.3-0.7g左右）,湿样(1.0g左右),饮料等其他液体样品 (1.0-2.0g左右),然后将其放入50mL消化管中, 加混酸15mL左右,过夜。次日，将消化管放入消化炉中，消化开始时可将温度调低（约130℃左右），然后逐步将温度调高（最终调至200℃左右）进行消化，一直消化到样品冒白烟并使之变成无色或黄绿色为止。若样品未消化好可再加几毫升混酸，直到消化完全。消化完后，待凉，再加5mL去离子水，继续加热，直到消化管中的液体约剩2mL左右，取下，放凉，然后转移至10mL试管中，再用去离子水冲洗消化管2-3次，并最终定溶至10mL。
样品进行消化时，应同时进行空白消化。
5.3 测定：将标准储备液配置成不同浓度系列的标准稀释液，以备上机使用。
不同浓度系列标准稀释液的配制
表(略)
实验条件：测定钙的波长为422.7nm仪器狭缝为0.5nm，灯位置、及电流等均按仪器使用说明调制至最佳状态，然后点火准备测定，首先，以各标准系列绘制标准曲线，然后逐一测定空白及样品，样品及空白均应先用8-羟基喹啉或1%镧溶液稀释后上机测定。
6.计算
根据仪器测定出的数据，代入公式进行计算。
（c-c0）×V×f×100
X （mg/100g）= ----------------------------
m×1000
式中：
c----测定样品中元素的浓度 mg/L
c0---空白值
V----样品定溶体积 mL
f-----稀释倍数
m----取样量 g （固体重量为g ，液体为mL）
钙的最低检出限为0.1μg/mL
7.注意事项
样品处理要防止污染，所用器皿均应使用塑料或玻璃制品，使用的试管器 皿均应在使用前泡酸，并用去离子水冲洗干净，干燥后使用。样品消化时 注意酸不要烧干，以免发生危险。
二、 滴定法 （EDTA法）
1原理
钙与氨羧络合剂能定量地形成金属络合物，其稳定性较钙与指示剂所形成的络合物为强。在适当的pH值范围内，以氨羧络合剂EDTA滴定，在达到定量点时，EDTA就自指示剂络合物中夺取钙离子，使溶液呈现游离指示剂的颜色（终点）。根据EDTA络合剂用量，可计算钙的含量。
2.仪器
（1） 微量滴定管（1-2mL）
（2） 碱式滴定管（50mL）
（3） 刻度吸管（0.5-1mL）
（4） 试管
3.试剂
（1） 硝酸（GB） 高氯酸（GB）
（2） 混合酸消化液：硝酸+高氯酸 按4：1混合
（3） 25mol/L氢氧化钾溶液：称取71.13克氢氧化钾，用去离子水定容至1000mL
（4） 1%氰化钠溶液：称取1.0克氰化钠，用去离子水定容至100mL
（5） 0.05 mol/L柠檬酸钠溶液：称取14.7克柠檬酸钠，用去离子水定容至1000mL
（6） EDTA溶液：称取4.50克EDTA（乙二胺四乙酸二钠），用去离子水定容至1000mL使用时稀释10倍即可。
（7） 钙红指示剂：称取0.1克钙红指示剂，用去离子水使其溶解并定容至100mL，此指示剂在4℃冰箱中可保存1个月。
（8） 去离子水：（KΩ）80万以上
以上试剂均需使用优级纯试剂，并放4℃保存
（9） 氨羧络合剂为乙二胺四乙酸的二钠盐
（10） 国家标准物质研究中心： 钙标准溶液浓度为1000μg/mL
（11） 钙标准储备液配制：取10mL标准溶液，移入100 mL容量瓶中，用去离子水定容至100mL
4.操作步骤
（1） 标定EDTA浓度：取0.5mL钙标准储备液，用EDTA溶液滴定，标定其EDTA 的浓度，根据滴定结果计算出每毫升EDTA相当于钙的毫克数，即滴定度T
（2） 样品及空白滴定：吸取0.1mL样品消化液及空白液于试管中，加1滴氰化钠溶液和0.1mL柠檬酸钠溶液，用滴定管加1.5mL氢氧化钾溶液，再加3滴钙红指示剂，立即以稀释10倍的EDTA溶液滴定，直到指示剂由紫变蓝为止。
5.计算：
T×(V-V0）×f×100
X （mg/100g）= ---------------------------
m
式中：T---EDTA滴定度 mg/mL
V----滴定样品时所用EDTA量 mL
V0---滴定空白时所用EDTA量 mL
v----样品定溶体积 mL
f-----稀释倍数
m----取样量 g （固体重量为g ，液体为mL）
本方法的检测范围为：5-50μg
6.注意事项
样品处理要防止污染，所用器皿均应使用塑料或玻璃制品，使用的试管器 皿均应在使用前泡酸，并用去离子水冲洗干净，干燥后使用。样品消化时 注意酸不要烧干，以免发生危险。加指示剂后，不要等太久，最好加后立即。加氰化钠和柠檬酸钠目的是除去其他离子的干扰。滴定时的 pH为12～24。 |
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